動(dòng)物腹腔鏡技術(shù)在牛體外受精中卵母細(xì)胞的收集（活體采卵）上的應(yīng)用

腹腔鏡技術(shù)采取卵母細(xì)胞的回收率與直接從卵巢采卵相比操作簡便，此外還可通過腹腔鏡進(jìn)行卵泡發(fā)育情況的檢查。

操作方法：

腹腔鏡的插入：將鈍頭套針插入套管，把套管插入陰道，通過直腸把握將套管前端定位于陰道穹隆預(yù)定部位，然后撤出鈍頭套針，插入棱錐套針，并調(diào)整角度。使套針的方向與牛的長軸略向右呈10°的夾角，向上用力穿透陰道穹隆。如阻力突然減少，則表明已經(jīng)刺穿陰道穹隆，此時(shí)取出套針，當(dāng)聽見有空氣進(jìn)入的聲音且直腸把握的手同時(shí)感到腹腔的膨脹，則表明刺入的位置正確，即可將消毒后的帶有內(nèi)窺鏡筒的不銹鋼鞘插入套管中去。根據(jù)直腸把握的感覺，若感到腔較小，則需充入一些CO2，進(jìn)氣的速度一般應(yīng)控制在,7~L/min,充入的氣體的多少因牛只的大小而定"一般為9L左右。

卵母細(xì)胞的采集：直腸把握操作者應(yīng)不斷地調(diào)整腹腔鏡與卵巢的位置，展示卵巢上不同位置卵泡及黃體的形態(tài)，以便確定需要穿刺的卵泡。一名助手根據(jù)直腸把握操作者的口令和屏幕上顯示的卵泡，操作穿刺針，采集卵泡液，將卵泡液放入事先加入少量培養(yǎng)液的收集管中。另一名助手負(fù)責(zé)操作腳踏真空泵，為了防止卵母細(xì)胞的流失，真空泵的啟動(dòng)（負(fù)壓應(yīng)在100mm汞柱)應(yīng)先于穿刺。收集后卵泡液靜置于試管架5~10min后，用吸管吸取收集管底部的卵泡液到平皿中，然后在光學(xué)顯微鏡下觀察。并將檢出的卵母細(xì)胞吸入到細(xì)管中。封閉好細(xì)管的兩端，卵母細(xì)胞即可運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室進(jìn)行成熟培養(yǎng)。操作完成后，將內(nèi)窺鏡鏡筒取出，由兩名助手按壓母牛兩側(cè)腹壁排出腹腔內(nèi)氣體，到氣體不再排出為止，再取出套管，隔日進(jìn)行陰道檢查，防止出現(xiàn)感染。

注意事項(xiàng)：

1、麻醉方面：不可過淺或過深。有效的麻醉是完成卵泡穿刺獲取卵母細(xì)胞的先決條件。 麻醉過淺，牛有痛感，在操作時(shí)不安、掙扎，會(huì)影響操作的準(zhǔn)確性，要補(bǔ)充麻醉。 麻醉過深，牛只站立不穩(wěn)，甚至臥下，也影響操作。如牛只臥下，應(yīng)立即停止操作，迅速撤出套管和腹腔鏡筒，同時(shí)還應(yīng)注意及時(shí)解除保定，避免牛只的受傷。

2、穿刺方面：直腸把握者在穿刺陰道穹隆時(shí)應(yīng)正確把握刺入角度，防止刺穿直腸和大腸。在穿刺卵泡時(shí)，針頭不宜刺的過深，否則會(huì)傷及卵巢實(shí)質(zhì)，造成出血，這不僅會(huì)污染卵泡液，影響卵母細(xì)胞的檢出，堵塞針頭和導(dǎo)管，而且還會(huì)影響卵巢上卵泡的恢復(fù)。 如遇出血，應(yīng)立即停止卵泡穿刺，更換針頭和導(dǎo)管及采集管，并用0.01mg肝素/ML生理鹽水沖洗針頭及導(dǎo)管，方可進(jìn)行下一個(gè)卵泡穿刺。

3、采集卵泡液方面：采集的卵泡液應(yīng)盡量保持恒溫，最好采集后立即檢出卵母細(xì)胞，并放入含有FSH的成熟培養(yǎng)液內(nèi)，包裝在細(xì)管中運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，一般從采出到放入培養(yǎng)箱進(jìn)行成熟培養(yǎng)的時(shí)間不宜超過4h。

4、技能方面：成功地運(yùn)用此方法，不僅需要良好的設(shè)備，還要求操作者具有較高的知識(shí)水平及熟練的實(shí)際操作能力，同時(shí)還需要與兩名助手密切配合。因此，在實(shí)驗(yàn)操作前必須要進(jìn)行必要的培訓(xùn)。

另外，還可以通過此方法從青年母牛體內(nèi)提早獲取卵母細(xì)胞，從而提高母牛的利用期限和繁殖潛力，加速遺傳進(jìn)展。該方法將是繼超數(shù)排卵和離體卵巢的利用技術(shù)之后的有一獲取卵源的好方法。

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